Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №9

Культуры, которые предварительно не подвергались воздействию перекиси, зачастую «замирают» на некоторое время, в течение которого мицелий адаптируется к новым условиям среды. Иногда мицелий начинает расти по направлению от перекисного агара. Подобное поведение можно наблюдать, когда производится перенос мицелия из чашки, первоначально содержавшей перекись, который затем подвергся разложению после полного освоения всей поверхности агара мицелием и последующей избыточной инкубации в течение нескольких дней. Тем не менее, рано или поздно мицелий адаптируется к новым условиям и начнет нормальный рост по всей поверхности свежей среды.

У меня никогда не было проблем со штаммами, которые длительное время находились в присутствии перекиси. Обычно я осуществляю до десяти переносов мицелия на перекисесодержащую среду, после чего возвращаюсь к эталонным культурам, хранящимся без перекиси, хотя мой выбор этого числа переносов является произвольным, а возврат к эталонной культуре может быть совсем не обязательно.

Заметьте, что перекись защищает только ту поверхность агаровой чашки, которая не содержит растущего на ней мицелия. Мицелий, сам по себе, является незащищенным, потому что он разлагает перекись по мере своего роста. В этой связи, чашки с мицелием, который полностью освоил поверхность агара и далее продолжал свой рост в течение нескольких дней, с большей вероятностью содержат источники скрытого заражения.

Предотвращение скрытого заражения с помощью инокуляции нижней стороны агара.

При последовательных переносах мицелия в нефильтрованной атмосфере, в нем могут аккумулироваться контаминанты, даже если в агаре всегда присутствует перекись, а мицелий никогда не осваивает всей поверхности чашки. Вы можете никогда не увидеть заражения, растущего на грибном мицелии в чашках, но при этом невидимые микроорганизмы будут понемногу обустраиваться на месте. Такое «тайное заражение» может представлять проблему вне зависимости от того, используете вы перекись в посевном и основном субстрате, или нет. Естественно, что при использовании не защищенного перекисью посевного или плодоносящего субстрата скрытые заражения могут расцвести на незащищенной среде с большей вероятностью.

Для того, чтобы предотвратить возможность такого скрытого заражения, я использую несложный прием: осуществляя переносы мицелия, я регулярно инокулирую нижнюю сторону агара (Как часто это делать, зависит от способа и времени хранения чашек. Безопаснее всего производить эту операцию каждый раз при переносе мицелия и как минимум с теми чашками, которые используются для переноса на последующие чашки. Вместе с тем, можно пропустить два или три переноса, прежде чем вы заметите какое-либо влияние на их успешное завершение). Я выполняю инокуляцию нижней стороны агара следующим образом:

1. Переворачиваю чашку вверх дном

2. Приподнимаю одну сторону малой чашки, как будто она скреплена шарниром с большой чашкой, и, с помощью простерилизованного на пламени скальпеля аккуратно отделяю через образовавшуюся щель агаровый диск, чтобы он переместился на большую чашку (если агар рвется или ломается на этом этапе, увеличьте его количество при подготовке среды.

3. Опускаю малую чашку на место, а затем, по мере готовности, переношу кусочек мицелия на открытую нижнюю сторону агара при помощи стерилизованного на пламени и охлажденного скальпеля.

4. В заключение, после инокуляции нижней стороны агара, закрываю чашку, переворачиваю ее и аккуратно, приподняв большую чашку, через образовавшуюся щель при помощи стерилизованного на пламени скальпеля возвращаю агаровый диск на место, т. е. на дно малой чашки. Агаровый диск теперь покрывает кусочек мицелия.

Эта манипуляция заставляет мицелий прорастать с нижней стороны агара сквозь среду на поверхность агарового диска, оставляя в процессе роста все источники заражения позади себя. Некоторые штаммы могут плохо реагировать на подобную методику, но у меня с этим пока что не было никаких проблем, потому что штаммы, которые я использовал, росли на среде весьма активно.

Вместе с тем, такая процедура заметно повышает риск заражения, по сравнению с простыми переносами, что связано с вовлечением в процесс дополнительных манипуляций. В то время, как я редко вижу заражения на агаровых чашках, инокулированных обычным способом (если среда достаточно свежая), при инокуляции нижней поверхности агара заражению подвергается примерно каждая пятая чашка.

Протирание поверхности стола и ваших пальцев спиртом перед началом работы поможет снизить число неудач.