В первый раз лечение этой сывороткой было применено молодому китайцу в Кантоне; он был спасен от тяжелой формы бубонной чумы посредством введения 30 к.с. сыворотки. Но в Кантоне эпидемия подходила к концу, и Иерсен отправился в Амой, где провел лечение сывороткой еще 23 больных бубонной чумой. Из них умерли только двое, несмотря на тяжесть болезни. За время отсутствия Иерсена в Кантоне его сыворотка была использована для лечения двух больных — оба выздоровели. Таким образом, всего на 26 случаев болезни — две смерти, т. е. 7,7 %, — результат блестящий для серотерапии бубонной чумы в конце XIX века. Он породил много завышенных надежд у ученых, никто из них не принял во внимание то обстоятельство, что лечение сывороткой Иерсен проводил в конце эпидемии, когда вирулентность у возбудителя чумы была снижена.
Однако от применения такой сыворотки Иерсену все же пришлось отказаться ввиду опасности для окружающих, исходящей от зараженных лошадей. В это самое время Ру устроил в Гарше, в окрестностях Парижа, конюшню на 25 лошадей для приготовления противочумной сыворотки. Однако иммунизация лошадей проводилась им не живыми культурами, а убитыми высокой температурой, или же токсинами, полученными в искусственных питательных средах.
Иерсен так же был вынужден сделать этот процесс безопасным. Его новая сыворотка готовилась следующим образом: суточная или двухсуточная культура возбудителя чумы, выращенная на агаре, смывалась дистиллированной водой. Получившуюся эмульсию медленно нагревали до температуры 55 °C. Затем эту жидкость вводили в вену лошади и получали сыворотку по общим правилам.
Следующие опыты на людях были сделаны Иерсеном в Бомбее, куда он отправился с небольшим запасом сыворотки из своей лаборатории. Лучшая серия имела «предохранительную силу» 0,1 к.с.; другие едва достигали до 0,5 к.с. Клинические наблюдения показали, что новая сыворотка менее эффективна, чем та, которую Иерсен применил в Китае. Результаты лечения обескуражили Иерсена. Первая группа больных — 51 человек, леченных такой сывороткой — дала смертность в 33 %. Через месяц Иерсен лечил следующую группу в 19 человек, однако смертность составила 72 %. Третья серия больных состояла из 13 человек, которым вводили сыворотку с «силой», равной 0,1 к.с., смертность этих больных 38 %. Последняя группа из 58 человек, леченная той же парижской сывороткой, дала 58 % смертности, что не отличалось от средней больничной смертности при чуме.
В 1897 г. и почти одновременно с упомянутыми опытами, аналогичные эксперименты с русской сывороткой (приготовленной по первому способу Иерсена), производил доктор А.М. Левин. Он применил в 23 случаях сыворотку Института экспериментальной медицины и Московского бактериологического института — получил 70 % смертности.
В следующем году эта сыворотка испробована доктором Ф.А. Ясенским в 50 случаях, причем смертность оказалась одинаковой со смертностью в 50 контрольных случаях, т. е. равной 80 %.
В том же году доктор Симонд испытал в Карачи, сыворотку, приготовленную по второму способу Иерсена в лаборатории Пастера; он ввел сс 75-ти больным бубонной чумою с результатом в 57 % смертности.
Итальянская комиссия, состоящая из профессора Люстига и докторов Галеотти и Маленкини, посетила Бомбей в 1897 г. для испытания своей сыворотки.
Введение 5–8 мг этого «нуклеотида» в брюшную полость или под кожу мелких животных неизбежно и очень скоро причиняло им смерть. Люстиг и Галеотти исследовали физиологические свойства этого вещества и нашли, что оно вызывает свертывание крови внутри сосудов, а в других случаях паралич сосудистой системы. В малых дозах (5 мг) чумной нуклеопротеид безвреден для человека, хотя вызывает лихорадку и чувство недомогания.
Испытать «нуклеотид» в качестве вакцины им не удалось, так как в Индии повсюду уже были введены хавкинские прививки. На обезьянах опыт удался вполне; 8 обезьян получили по 1,7 сантиграмм «нуклеотида» и хорошо перенесли заражение чумой; девятой обезьяне ввели 1,88 сантиграмма вещества, и она погибла.
Для получения сыворотки иммунизировали «нуклеотидом» лошадь (по обычному способу), для чего потребовалось в течение месяца 97 сантиграмм вещества.
В результате такой иммунизации получилась сыворотка, которая была применена в Бомбее, в Arthur Road Hospital, для лечения шести больных чумой; из них пятеро выжили, один умер. Затем в Пуне (город в Бомбейском президенстве) Люстиг испытал сыворотку при лечении 24 тяжелых больных, из них умерли только трое.