В феврале 1898 г. Бомбейский муниципалитет поручил профессору Люстигу заготовление лечебной сыворотки в больших количествах. В этом же году по приглашению индийского правительства Галеотти и Польверини приступили к систематическому лечению сывороткой больных чумой в госпитале муниципалитета Бомбея (Arthur Road Hospital). Сыворотку готовил сам Люстиг в своей лаборатории во Флоренции.
Клинические наблюдения над действием сыворотки были сделаны итальянцами вместе с доктором Хоксом (Choxey), заведующим госпиталем. Сыворотка вводилась под кожу в области плеча или бедра шприцем Ру. Среднее количество сыворотки, полученное каждым больным за все время лечения, колебалось между 80 к.с. и 120 к.с. Ни разу не наблюдали осложнения на месте инъекции.
Результаты лечения оказались различные — в зависимости от лошади, от которой получена сыворотка. Группа в 71 человек, леченная сывороткой № 1, дала 74,6 % смертности; вторая группа в 30 человек, леченная сывороткой № 2, дала 46,6 % смертности, третья группа из 54 больных, леченная сывороткой № 3 дала 25 смертей, т. е. 46 % и, наконец, из последней группы (20 человек), леченной сывороткой № 4, умерло меньше всего — 8 человек, т. е. 40 %.
В сумме 175 заболеваний дали смертность — 57,1 %, а с 30-ю прежними случаями смертность оказалась равной 50,7 %.
Среди больных доктора Хокса 18 было очень тяжелых, получивших сыворотку лишь для испытания ее силы в безнадежных случаях, что увеличило процент смертности. Кроме того, присланная из Флоренции сыворотка мутилась по дороге, что, очевидно, уменьшало ее лечебные свойства. В каждом отдельном случае применения сыворотки, даже в тех случаях, где наступал позднее летальный исход, эффект проявлялся через 3–4 часа после ее введения: понижалась температура, наступало улучшение общего состояния. Изредка понижение температуры сопровождалось упадком сил, близким к коллапсу, что требовало применения возбуждающих средств.
Исследование лимфатических узлов на содержание чумных бацилл показало, что спустя 24–36 часов после применения сыворотки их количество в бубонах значительно уменьшалось. Полученные разводки возбудителя чумы не обладали прежней вирулентностью. У больных, поправлявшихся под влиянием сыворотки, выздоровление шло быстрее, чем при естественном течении болезни; поправились даже больные, у которых была септицемическая форма чумы, напротив, при легочных формах, при желудочно-кишечной форме, введение сыворотки даже иногда обостряло течение болезни — все такие больные умерли.
Недостатком наблюдений, выполненных Люстигом в Arthur Road Hospital, было отсутствие контрольных опытов. Получившаяся средняя смертность при лечении итальянской сывороткой (50,7 %) немногим отличалась от смертности, полученной при опытах с другими сыворотками.
После того как Иерсен стал получать сыворотку самостоятельно, в лаборатории Пастера стали готовить токсинную сыворотку. В противоположность предыдущим методам французы не пользовались для иммунизации лошадей телами убитых бактерий, а только их «токсинами», вернее теми субстанциями, которые они тогда за них принимали.
Возможность получения «чумного токсина» из культуры доказал Ру. Он заключал возбудитель чумы в маленькие мешочки из коллодия и помещал их в брюшную полость кроликов. Развитию бацилл не мешали живые клетки организма, и в то же время они получали обильное питание благодаря «диффундирующим сокам».
(Сильно размножившимися в мешочках бациллами засевали питательный бульон, содержащий 0,5 % желатины. Спустя несколько дней бульон фильтровали через свечу Шамберлана при разряжении воздуха и получали опалесцирующую жидкость, которая убивала животных в короткое время.
Токсинная сыворотка Института Пастера не была испытана на людях и Индии. Сравнивая результаты, полученные при лечении иерсеновкой и люстиговской сыворотками, нетрудно убедиться, что процент смертности получился почти одинаковый. Французская сыворотка дала несколько большую смертность, чем итальянская.
Эксперименты экспедиции В.К. Высоковича.
Основные усилия русских исследователей были направлены на выяснение механизмов инфицирования возбудителем чумы и оценки защитных свойств сыворотки. Сначала они определились с экспериментальной моделью. Предварительные опыты, выполненные на обезьянах (в основном на макаках), показали, что эти животные весьма восприимчивы к возбудителю чумы. Небольшое количество свежей агаровой культуры чумных палочек, введенное под кожу предплечья обезьяны, вызывало у нее через один пни два дня температуру до 40,5-41,5 °C, в подмышечной области ранги палея бубон величиной с горошину. На месте же прививки уже на следующий день образовывалась припухлость, затем значительно распухала вся конечность. Зараженные обезьяны погибали на 4–5 день, и после смерти у них обнаруживали все характерные изменения чумы, как и у человека.